Русскоязычный медицинский портал

 

ГЕЛЬМИНТОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ


281   -

ГЕЛЬМИНТОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ, применяемые в медицине, имеют целью обнаружить присутствие паразитических червей в тех или иных органах и тканях человека для постановки точного диагноза. Большинство гельминтологических методов исследования сводится к так называемой гельминтоскопии, т. е. к непосредственному обнаружению элементов паразитических червей (цельных экземпляров, фрагментов, яиц, личинок и пр.). Другие методы, не обнаружива1ощие непосредственно элементов паразитических червей, позволяют, однако, косвенным путем делать заключения об их присутствии; сюда относятся такие методы, как рентгеноскопия, иммунно-биологические реакции, изучение морфол. состава крови и пр. Наконец, нек-рые методы путем той или иной обработки паразитических червей или их элементов имеют целью их сохранение, культивирование, окраску и пр. для детального изучения и точного определения.

Первым специально Г. методом исследования должна считаться попытка обнаружения яиц паразитических червей жел.-киш. тракта в фекалиях, введенная в практику Давеном (Davaine) в 1853 г. Метод этот был усовершенствован Люцом (Lutz), который в 1893 г. применил предварительное промывание экскрементов водой с последующим исследованием осадка, чем достигалось обогащение препарата яйцами и очищение поля зрения от инородных элементов. В 1906 г. Басс (Bass) предложил обрабатывать экскременты насыщенным раствором хлористого кальция, т. е. жидкостью большего удельного веса, чем яйца паразитических червей, к-рые, благодаря этому, всплывали на поверхность и обнаруживались путем исследования верхнего слоя смеси. В дальнейшем было предложено большое количество методов обработки экскрементов, основанных, гл. обр., на этих двух принципах осаждения и всплывания яиц. Были выработаны методы количественного учета яиц. Стали производиться исследования не только экскрементов, но и других экскретов, секретов, а также тканей человеческого тела. Предложены методы культивирования паразитических червей на специальных средах. Разработан Скрябиным метод полных гельминтологических вскрытий, дающий возможность определять не только качественный состав гельминтофауны данного индивидуума, но и количественный, с точным учетом всех особей каждого вида паразитических червей и точным определением локализации их.-— В настоящее время чаще начинают находить применение для диагностики гельминто-зов методы иммунно-биологических реакций (преципитации, реакция связывания комплемента, кожные реакции и пр.), методы рентгено-диагностики, офтальмоскопии и некоторые другие.

Метод полных гельминтологических вскрытий человека. После предварительного осмотра кожных покровов и слизистых, последующего снятия кожи и исследования подкожной клетчатки производят вскрытие. Выделяют системы органов и осматривают серозные полости. Берут для трихинелоско-пии группы мышц (глазные, ножки диафрагмы, интеркостальные мышцы), к-рые исследуются так же, как при биопсии (см. ниже). Вскрывают и исследуют синовиальные полости, глаза, спинной и головной мозг. Осторожно изолируют органы всех систем так, чтобы не перерезать паразитов, и приступают к исследованию с применением следующих способов:1.Способ последовательного промывания и сливов жидкости с осадка до полной прозрачности промывных вод. Так обрабатываются 1) содержимое органов (желудка, всех участков кишок, желчного пузыря, глаз; моча; кровь из сердца, крупных сосудов и собравшаяся при вскрытии в грудной и брюшной полостях), 2) паренхиматозные органы после предварительного измельчения пальцами (печень, поджелудочная железа, легкие, почки, половые органы).—II. Способ компрессорного исследования соскобов. Соскабливается слизистая со всех полостных органов (пищевод, желудок, все отделы кишечника, желчный пузырь, трахея, крупные бронхи, почечные лоханки, мочеточники, мочевой пузырь, половые органы) и,сжимаемая между двумя компрессорными стеклами, исследуется посредством лупы.-—

III. Способ размозжения тканей между стеклами (компрессура). Размозжаются между двумя стеклами до степени прозрачности послойные разрезы паренхиматозных органов (головной и спинной мозг; можно также почки и половые органы).—

IV. Способ исследования «матрикса» (отмытого содержимого полостей разных органов) поочередно на белом и черном фоне с целью собрать всех видимых невооруженным глазом паразитов.—V. Способ исследования «матрикса» соскобов и размозженных тканей при помощи лупы.

Аппаратура и реактивы при полных гельминтологических вскрытиях. Помимо обычного набора инструментария, употребляемого при патолого-анат. вскрытиях, необходимы: маленькие ножницы с узкими концами для возможно глубокого проникновения по ходам бронхов, желчных путей и пр.; стеклянные цилиндры для последовательного промывания и подставка к ним; ванночки или фотографические кюветы для изоляции органов и просмотра осадка; препаровальная лупа и чашки Петри для просмотра осадка под лупой; компрессорные стекла (8x24 см), предметные и покровные. Для вылавливания паразитов: препаровальные иглы, глазные пинцеты, кисточки, пипетки глазные с каучуковым баллоном. Физиол. раствор при вскрытии сердца, крупных сосудов и промывании крови. Жидкость Барбагалло [3%-ный раствор продажного формалина (40% формальдегида) в физиол. растворе] — для фиксации и сохранения круглых червей. 75%-ный спирт для фиксации и сохранения плоских и колючеголовых червей.

Методы исследования экскрементов подразделяются на макрогель-минтоскопию и микрогельминтоскопию экскрементов. Для макрогельминтоскопии экскременты смешиваются с водой, а еще лучше—с физиологич. раствором, до жидкой консистенции и рассматриваются в черных ванночках при ярком освещении. Когда отыскивают мелкие формы, то применяют способ последовательного промывания экскрементов до прозрачности промывных вод и осадок исследуют и в ванночках и под лупой. Для микрогельминтоскопии существует много методов, наиболее употребительные из к-рых приведены ниже. Микро-гельминтоскопия всегда должна проводиться параллельно с макрогельминтоскопией экскрементов, а макрогельминтоскопия иногда применяется изолированно, напр., при контрольном исследовании экскрементов после дегельминтизации. Так как большинство микрогельминтоскопич. методов имеет задачей обнаружить яйца паразит, червей в разных экскретах и секретах, то они именуются методами гельминтоовоскопии.— Метод нативного мазка. Частичка экскрементов, величиной менее просяного зерна, растирается на предметном стекле помощью спички с капелькой 50%-ного раствора глицерина (или физиологического раствора соли) и исследуется под покровным стеклом. Является, главным образом, подсобным методом.—М етод Телемана (Telemann) в модификации Миягава (Miya-gava). Экскременты, объемом с лесной орех, тщательно «встряхиваются» в пробирке или, лучше, растираются в ступке с равными количествами 50%-ной соляной кислоты и серного эфира; смесь фильтруется через сито, центрифугируется, осадок исследуется.—Метод Кофоида и Барбе-р a (Kofoid, Barber) в модификации Фюлле-борна (Fulleborn; неправильно именуется методом Фюллеборна). Экскременты тщательно смешиваются в стакане или иной посуде с насыщенным раствором поваренной соли (для насыщения 1 л воды требуется 400 г соли) в отношении 1 :20 (приблизит.). Грубые части экскрементов, не поддавшиеся растиранию и всплывшие на поверхность смеси непосредственно после смешения, удаляются шпаделем. Смесь должна стоять в течение 1—2 часов (а не г/«—Зи часа, как рекомендует Фюллеборн), после чего поверхностный слой, содержащий всплывшие яйца, снимается платиновой или простой проволочной петлей, около 0,8 мм в диаметре, согнутой под прямым углом к ручке, при помощи соприкосновения петли с поверхностным слоем смеси. Пленка, оставшаяся в петле, переносится на предметное стекло и исследуется.— Метод Дарлинга (Darling) является комбинированным, основанным на принципах и осаждения и всплывания. Экскременты смешиваются с водой до полужидкой консистенции, смесь центрифугируется, жидкость сливается, к осадку добавляется насыщенный раствор поваренной соли и глицерина в равных количествах, после чего смесь вновь центрифугируется. Плавающие на поверхности яйца снимаются маленькими кусочками ваты, к-рые исследуются в течение первого часа (пока яйца не успели просветлиться). Необходимо отметить, что яйца трематод и лентецов всплывают труднее, чем нематод и цепней, т. ч. методы всплывания следует дополнять хотя бы методом мазка.— Метод Столла (Stoll)—количественного учета яиц. В пробирку с пометкой 45 куб. см отвешивают 3 г экскрементов; доливают до метки 45 куб. см децинорм. раствора едкого натрия; тщательно встряхивают со стеклянными шариками до получения равномерной эмульсии; быстро набирают градуированной пипеткой из пробирки 0,15 куб. см и выливают смесь на предметное стекло, покрывают покровным 22x44 мм и сосчитывают яйца. Число яиц, имеющихся в препарате, помноженное на 100, равно числу яиц, заключающихся в 1 г экскрементов. Для большей точности Столл рекомендует проделывать двукратное исследование. Из других методов количественного учета яиц можно упомянуть о методе Гунга (Hung), основанном на принципе всплывания, и методе Лена (Lane)—комбинации принципов всплывания и осаждения.

В виду того, что исследование экскрементов дает совершенно ненадежные результаты в отношении обнаружения яиц Entero-bius vermicularis (острицы), существуют специальные,более точные методы исследования на энтеробиоз. Из них наиболее распространенный — метод соскоба с перианальных складок. Производится соскоб со слизистой, окружающей anus, и с соприкасающегося с ней участка кожи помощью косо срезанной спички, смоченной в 50%-ном растворе глицерина. Соскоб переносится в каплю 50%-го раствора глицерина на предметном стекле, куда тщательно соскабливается другой спичкой или краем предметного стекла. Методом соскоба целесообразно пользоваться для исследования, на энтеробиоз также и подногтевых пространств, промежности, вульвы (как слизистой оболочки ее, так и выделений) и'т. п.

Исследование мокроты. Мокрота накладывается на стеклянную пластинку, накрывается другой (компрессорный метод) и исследуется макроскопически как на черном и белом фоне, так и посредством лупы. Для детального исследования препарат мокроты на стеклянной пластинке просматривают с помощью микроскопа. Можно исследовать мокроту методом мазка и по Телеману.—Исследование дуоденального сока и пузырной желчи. Выбираются и исследуются под микроскопом хлопья слизи; дуоденальный сок или пузырная желчь смешиваются с большим количеством эфира, центрифугируются; осадок исследуется.-— Исследование мочи: исследуется осадок после центрифугирования на присутствие паразитических червей или их элементов (яйца, личинки, фрагменты и пр.). Предложенная Ефимовым химич. реакция на обнаружение в моче глистных токсинов путем воздействия на нее азотнокислой закисью ртути оказалась не специфичной. При специальных показаниях подвергаются исследованию носовая слизь, желудочный сок и рвотные массы, транс- и эксудаты и всевозможные пунктаты. Смотря по надобности, применяются: мазок, простое центрифугирование, метод Телемана.—Исследование к р о-в и производится или для непосредственного обнаружения паразитич. червей (микро-филярии при филяриозах) или для изучения изменений состава крови при тех или иных глистных заболеваниях. Микрофилярии можно изучать в живом состоянии в капле крови под покровным стеклом, края к-рого смазаны вазелином для предохранения препарата от подсыхания. Можно кровь, смешанную для устранения свертывания с лимоннокислым натром, предварительно центрифугировать, и тогда в осадке концентрируются микрофилярии. Возможно пользование и прижизненной окраской микрофилярий, для чего к свежей капле на предметном стекле прибавляют немного краски, приготовленной на физиол. растворе соли (лучше всего азур II со слабым раствором эозина или ней-тральрота). Для приготовления постоянных препаратов микрофилярий делаются толстые мазки крови, которые фиксируются обычным способом, или же покровные стекла со свежими, еще влажн. мазками крови помещаются в 60—70°-ный подогретый спирт. Для окраски пользуются гематоксилином Бемера (Bohmer), солянокислым кармином, метиленовой синькой с фуксином, раствором Гимза и др. Наиболее удачную окраску дают способ Романовского-Гимза и азур II.

Для специального исследования на три-хинелез и цистицеркоз прибегают к биопсии тканей (мышцы, межмышечная соединительная ткань, подкожная клетчатка). Маленькие кусочки мышц распрепаровы-ваются препаровальными иглами на отдельные волокна, сильно сжимаются между двумя предметными стеклами (еще лучше — в специальных компрессориях) и исследуются помощью слабого увеличения микроскопа. Если подозревается цистицеркоз, то тщательно осматриваются подкожная клетчатка и соединительнотканные прослойки мышц для более детального изучения подозрительных образований. Гельминтоовоскопия, а равно исследование личинок ларазитических червей и их фрагментов производятся при помощи микроскопа [окуляр 3 или 4, объектив 3 (или А А) при несколько затемненном поле зрения]. Подозрительные образования и яйца для точной диагностики рассматриваются с тем же окуляром, при объективе 6, 7 или 8 (или D D). Исследуемый материал необходимо рассматривать под покровным стеклом. Для точной диагностики во многих случаях приходится прибегать к измерению длииы и ширины яиц, т. е. к так наз. гель-минтоовометрии (см. Микрометрия). Начинающим рекомендуется применять гельмин-тоовометрию и при исследовании банальных форм. Измерение яиц следует производить с помощью объективов 6—8 или эквивалентного им по степени увеличения. Измеряют максимальную длину и ширину наиболее зрелых яиц, т. е. располагающихся ближе к отверстию вульвы (при измерении яиц, заключенных в половых органах паразита). У цестод, кроме яйца, измеряют диаметры онкосферы и длину крючьев.

Метод культивирования паразитических червей на специальных средах впервые был предложен Лоосом (Loos). Экскременты, разведенные водой до полужидкой консистенции, смешиваются в чашке Петри с растертым в порошок животным углем, взятым в двойном количестве. Культура ставится на 4—5 дней при 30°. Вылупившиеся из яиц и выросшие личинки смываются водой; вода фильтруется; фильтр, на стенках которого собираются личинки, складывается в виде мешочка и опускается в цилиндр с водой, в которую и проникают личинки, образуя «чистую культуру». В дальнейшем многие авторы видоизменяли этот метод, предлагая вместо животного угля брать прокаленную землю, агар, на к-ром помещались кусочки экскрементов (Фюл-леборн). В последнем случае присутствие личинок обнаруживалось макроскопически по зигзагообразным ходам, оставляемым ими при передвижении.—Методы обработки гельминтологического материала для изучения. Для изучения деталей строения паразитических червей после фиксации их пользуются след.методами. Nematoda просветляются в молочной кислоте. Cestoda окрашиваются в слабом (5—10%-ном) растворе гематоксилина Гренахер-Делафильда (Grenacher-Delafield) или квасцового гематеина Майера (Mayer). Trematoda окрашиваются квасцовым кармином. После окраски паразиты заключаются в канадский бальзам по правилам гист. техники. Для сохранения экскрементов, содержащих яйца, их разбавляют водой до полужидкой консистенции и смешивают с 10%-ным формалином или со смесью равных количеств 5%-ного формалина и 5%-ного глицерина. Для приготовления микроскопич. препаратов яиц их заключают на предметном стекле в капельку подогретой глицерин-желатины (желатины—2 г; Aq. destill.—12 куб. см; глицерина—7 е; несколько капель Acid, carbol.; хорошенько смешать на водяной бане) и накрывают покровным стеклом. Менее стойкие яйца (например, Hymenolepis папа, Trichostrongylidae, Ankylostoma, Necator) лучше сохранять в Бар-багалловской жидкости после предварительной обработки экскрементов по методу Телемана; покровное стекло окантовывается густым канадским бальзамом, который для разжижения подогревается.

Лит.: Подъяпольская В. П., Диагностика глистных инвааий методом исследования экс

крементов, М., 1926; В и т е н С е р г Г. Г., Современные методы обнаружения яиц паразитических червей в экскрементах, «Профилактическая медицина», 1925, № 6; Скрябин К. И., Метод полных гельминтологических вскрытий позвоночных, включая человека, М., 1928; Скрябин К. И., П о д ъ я-польская В. П. и Шульц Р. Э. С., Гель-минтофаунистические вскрытия как точный метод изучения гельминтофауны человека, «Рус. шурнал тропической медицины», 1927, .№5; Шульц Р. Э. С., Методы гельминтокопрологического исследования и их оценка, «Лабораторная практика», 1925, № 1; Loos A., Technik der Wurmuntersuchung (Handbuch d. mikroblologlschen Technik, hrsg. v. R. Kraus und P. Uhlenhutb, B. Ill, p. 2305—2344, B.—Wien, 1924); Hung S. L., tJber den Nachweis yon Hakenwurm-eiern im Kote, den Wert Hirer quantitativen Bestim-mung und elne einfache neue Methode fur letztere, Archiv fflr Schlffs- u. Tropenbygiene, В. XXX, H. 9, 1926; Ffl 1 le b о r n F., Eine Methode zur Isolle-rung von Hakenwurm- und anderen thermotaktischen Larven aus Gemischen mit freilebenden Erdnema-toden, Ibid., Band XXIX, H. 10, 1925; Liess J., Vergleiehende Untersuchungen iiber die Brauchbarkeit verschiedener Flotationsmedien zum Nachweis von Parasiteneiern im Kot der Haustlere, Dissertation, Hannover, 1925; Luger A., Grundriss der klini-schen Stuhluntersuchung, B., 1928; Langeron M. et Rondeau du Noyer М., Coprologie micro-scoplque, P., 1926.    В. Подъяпольская.

    name:
    send
ТАКЖЕ НА dao-med
f72e2aa373650d944c38b1c8ca875576 0467ccb0286829346e4d1560ef2b3c04 21de8b841f2edeacafb65f278dfd5f07